Ẹ ṣeun fún ṣíbẹ̀wò sí nature.com. Ẹ̀yà ẹ̀rọ ìṣàwárí tí ẹ ń lò ní àtìlẹ́yìn CSS díẹ̀. Fún ìrírí tí ó dára jùlọ, a gbà yín nímọ̀ràn pé kí ẹ lo ẹ̀yà ẹ̀rọ ìṣàwárí tuntun (tàbí kí ẹ pa ipò ìbáramu nínú Internet Explorer). Ní ​​àfikún, láti rí i dájú pé ẹ ń tẹ̀síwájú láti ṣe àtìlẹ́yìn, ojú-òpó yìí kò ní ní àwọn àṣà tàbí JavaScript.
A ṣe synthon 3-(anthracen-9-yl)-2-cyanoacryloyl chloride 4 tí a sì lò láti ṣe onírúurú àwọn èròjà heterocyclic tí ó ń ṣiṣẹ́ gidigidi nípasẹ̀ ìṣesí rẹ̀ pẹ̀lú onírúurú nucleophiles nitrogen. A ṣe àfihàn ìṣètò èròjà heterocyclic kọ̀ọ̀kan nípa lílo ìwádìí spectroscopic àti elemental. Mẹ́wàá nínú àwọn èròjà heterocyclic tuntun fihàn pé ó ń mú kí ó lágbára sí àwọn bakitéríà tí ó ní ìdènà oògùn púpọ̀ (MRSA). Láàrín wọn, àwọn èròjà 6, 7, 10, 13b, àti 14 fi iṣẹ́ antibacterial tí ó ga jùlọ hàn pẹ̀lú àwọn agbègbè ìdènà tí ó súnmọ́ 4 cm. Síbẹ̀síbẹ̀, àwọn ìwádìí molecular docking fi hàn pé àwọn èròjà náà ní àwọn ìbáṣepọ̀ ìsopọ̀ tí ó yàtọ̀ sí protein penicillin-binding 2a (PBP2a), ibi tí ó jẹ́ ibi pàtàkì fún ìdènà MRSA. Àwọn èròjà kan bíi 7, 10 àti 14 fi ìbáṣepọ̀ ìsopọ̀ tí ó ga àti ìdúróṣinṣin ìbáṣepọ̀ hàn ní ibi tí PBP2a ti ń ṣiṣẹ́ ní ìfiwéra pẹ̀lú ligand quinazolinone co-crystallized. Ní ìyàtọ̀ sí èyí, àwọn èròjà 6 àti 13b ní àwọn àmì ìdènà tó kéré síi ṣùgbọ́n wọ́n ṣì fi agbára ìdènà bakitéríà tó ṣe pàtàkì hàn, pẹ̀lú èròjà 6 tó ní ìwọ̀n MIC tó kéré jùlọ (9.7 μg/100 μL) àti MBC (78.125 μg/100 μL). Ìwádìí ìdènà fi àwọn ìbáṣepọ̀ pàtàkì hàn pẹ̀lú ìsopọ̀ hydrogen àti π-stacking, pàápàá jùlọ pẹ̀lú àwọn èròjà bíi Lys 273, Lys 316 àti Arg 298, èyí tí a dá mọ̀ gẹ́gẹ́ bí èyí tí ó ń bá ligand tí a so pọ̀ nínú ìṣètò kristali ti PBP2a lò. Àwọn èròjà wọ̀nyí ṣe pàtàkì fún ìṣiṣẹ́ enzymatic ti PBP2a. Àwọn àbájáde wọ̀nyí fi hàn pé àwọn èròjà tí a ti ṣẹ̀dá lè ṣiṣẹ́ gẹ́gẹ́ bí àwọn oògùn tí ó lè dènà MRSA, èyí tí ó ń fi hàn pé ó ṣe pàtàkì láti so ìdènà mọ́líkúlù pọ̀ mọ́ àwọn ìwádìí bio láti dá àwọn olùṣètọ́jú tó gbéṣẹ́ mọ̀.
Ní àwọn ọdún díẹ̀ àkọ́kọ́ ti ọ̀rúndún yìí, àwọn ìsapá ìwádìí ni a gbájúmọ́ lórí ṣíṣe àwọn ìlànà àti ọ̀nà tuntun tí ó rọrùn fún ìṣẹ̀dá ọ̀pọ̀lọpọ̀ àwọn ètò heterocyclic tuntun pẹ̀lú ìṣiṣẹ́ antimicrobial nípa lílo àwọn ohun èlò ìbẹ̀rẹ̀ tí ó wà nílẹ̀.
Àwọn ẹ̀yà Acrylonitrile ni a kà sí àwọn ohun èlò ìbẹ̀rẹ̀ pàtàkì fún ìṣẹ̀dá ọ̀pọ̀lọpọ̀ àwọn ètò heterocyclic tó yanilẹ́nu nítorí pé wọ́n jẹ́ àwọn èròjà tó ń ṣiṣẹ́ dáadáa. Jù bẹ́ẹ̀ lọ, a ti lo àwọn èròjà 2-cyanoacryloyl chloride ní ọ̀pọ̀ ọdún àìpẹ́ yìí fún ìdàgbàsókè àti ìṣẹ̀dá àwọn ọjà tó ṣe pàtàkì nínú iṣẹ́ ìṣègùn, bíi àwọn oògùn onígbà díẹ̀díẹ̀1,2,3, àwọn ohun tó ń ṣáájú ìdènà HIV, àwọn èròjà ìdènà àrùn, àwọn èròjà ìdènà àrùn jẹjẹrẹ, àwọn èròjà ìdènà àrùn, àwọn èròjà ìdènà àrùn, àwọn èròjà ìdènà àrùn àti àwọn èròjà antioxidant4,5,6,7,8,9,10. Láìpẹ́ yìí, ipa ti anthracene àti àwọn èròjà rẹ̀, títí kan oògùn aporó wọn, àwọn èròjà ìdènà àrùn jẹjẹrẹ11,12, àwọn èròjà ìdènà àrùn jẹjẹrẹ13,14,15 àti àwọn ohun ìní ìdènà àrùn jẹjẹrẹ16,17, ti fa àfiyèsí púpọ̀18,19,20,21. Àwọn èròjà ìdènà àrùn tó ní àwọn èròjà acrylonitrile àti anthracene ni a fihàn ní Àwòrán 1 àti 2.
Gẹ́gẹ́ bí Àjọ Ìlera Àgbáyé (WHO) (2021) ti sọ, agbára ìdènà àwọn kòkòrò àrùn (AMR) jẹ́ ewu kárí ayé sí ìlera àti ìdàgbàsókè22,23,24,25. Àwọn aláìsàn kò lè rí ìwòsàn, èyí tí ó ń yọrí sí pípẹ́ sí ilé ìwòsàn àti àìní fún àwọn oògùn olówó gọbọi, àti àìkú àti àìlera tí ó pọ̀ sí i. Àìsí àwọn kòkòrò àrùn tí ó gbéṣẹ́ sábà máa ń yọrí sí àìlètọ́jú fún onírúurú àkóràn, pàápàá jùlọ nígbà ìtọ́jú chemotherapy àti àwọn iṣẹ́-abẹ pàtàkì.
Gẹ́gẹ́ bí ìròyìn Àjọ Ìlera Àgbáyé ti ọdún 2024, Staphylococcus aureus (MRSA) àti E. coli tí ó ní ìdènà methicillin wà lára ​​àwọn àkóràn pàtàkì. Àwọn bakitéríà méjèèjì kò fara mọ́ ọ̀pọ̀lọpọ̀ àwọn aporó, nítorí náà wọ́n dúró fún àwọn àkóràn tí ó ṣòro láti tọ́jú àti láti ṣàkóso, àti pé ó ṣe pàtàkì láti ṣe àwọn agbo ogun aporó tuntun tí ó gbéṣẹ́ láti yanjú ìṣòro yìí. Anthracene àti àwọn ohun tí ó yọrí sí i jẹ́ àwọn aporó aporó tí a mọ̀ dáadáa tí ó lè ṣiṣẹ́ lórí bakitéríà Gram-positive àti Gram-negative. Ète ìwádìí yìí ni láti ṣe àgbékalẹ̀ ohun tuntun tí ó lè gbógun ti àwọn àkóràn wọ̀nyí tí ó léwu sí ìlera.
Àjọ Ìlera Àgbáyé (WHO) ròyìn pé ọ̀pọ̀lọpọ̀ àwọn kòkòrò àrùn kòkòrò àrùn ló ń kojú ọ̀pọ̀lọpọ̀ oògùn apàrora, títí bí Staphylococcus aureus (MRSA) tí ó ní methicillin-resistant, èyí tí ó jẹ́ okùnfà àkóràn tí ó wọ́pọ̀ ní àwùjọ àti àwọn ibi ìtọ́jú ìlera. Àwọn aláìsàn tí wọ́n ní àkóràn MRSA ni a ròyìn pé ó ní ìwọ̀n ikú tí ó ga ju 64% lọ ju àwọn tí wọ́n ní àkóràn tí ó lè fara hàn fún oògùn lọ. Ní àfikún, E. coli jẹ́ ewu kárí ayé nítorí pé ìlà ààbò ìkẹyìn lòdì sí Enterobacteriaceae tí ó ní carbapenem-resistant (ìyẹn, E. coli) jẹ́ colistin, ṣùgbọ́n àwọn bakitéríà tí ó ní agbára láti kojú colistin ti ṣẹlẹ̀ ní ọ̀pọ̀ orílẹ̀-èdè láìpẹ́ yìí. 22,23,24,25
Nítorí náà, gẹ́gẹ́ bí Àjọ Ìgbésẹ̀ Àgbáyé ti Àjọ Ìlera Àgbáyé lórí Ìdènà Àìsàn-à ...
Àwọn àtúnyẹ̀wò ìwé tí a ti ṣe tẹ́lẹ̀ mú kí a ṣe àgbékalẹ̀ àwọn ohun tuntun nínú àwọn kíláàsì wọ̀nyí. Nítorí náà, ìwádìí yìí ní èrò láti ṣe àgbékalẹ̀ àwọn ètò heterocyclic tuntun tí ó ní àwọn ẹ̀yà anthracene àti acrylonitrile, láti ṣe àyẹ̀wò ipa antimicrobial àti antibacterial wọn, àti láti ṣe ìwádìí lórí ìbáṣepọ̀ ìsopọ̀ wọn pẹ̀lú penicillin-binding protein 2a (PBP2a) nípa molecule docking. Ní títẹ̀lé àwọn ìwádìí tí ó ti ṣe tẹ́lẹ̀, ìwádìí yìí tẹ̀síwájú nínú ìṣẹ̀dá, ìṣàyẹ̀wò bíóláìkì, àti ìṣàyẹ̀wò ìṣirò ti àwọn ètò heterocyclic láti ṣàwárí àwọn aṣojú antimethicillin-resistance Staphylococcus aureus (MRSA) tí ó ní agbára ìdènà PBP2a31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42,43,44,45,46,47,48,49.
Ìwádìí wa lọ́wọ́lọ́wọ́ dá lórí ìṣẹ̀dá àti ìṣàyẹ̀wò àwọn ohun èlò ìpakúpa ara tuntun tí ó ní àwọn ẹ̀yà anthracene àti acrylonitrile. A pèsè 3-(anthracene-9-yl)-2-cyanoacryloyl chloride 4, a sì lò ó gẹ́gẹ́ bí ohun èlò ìkọ́lé fún kíkọ́ àwọn ètò heterocyclic tuntun.
A lo data spectral lati pinnu eto compound 4. 1H-NMR spectrum fihan wiwa CH= ni 9.26 ppm, IR spectrum fihan wiwa ẹgbẹ carbonyl ni 1737 cm−1 ati ẹgbẹ cyano kan ni 2224 cm−1, ati 13CNMR spectrum tun jẹrisi eto ti a dabaa (wo apakan Idanwo).
A ṣe àgbékalẹ̀ ìṣẹ̀dá 3-(anthracen-9-yl)-2-cyanoacryloyl chloride 4 nípa lílo hydrolysis ti àwọn ẹgbẹ́ aromatic 250, 41, 42, 53 pẹ̀lú omi ethanolic sodium hydroxide (10%) láti fún àwọn acids 354, 45, 56, èyí tí a fi thionyl chloride tọ́jú lórí omi ìwẹ̀ láti fún acryloyl chloride derivative 4 ní èso gíga (88.5%), gẹ́gẹ́ bí a ṣe fihàn ní Àwòrán 3.
Láti ṣẹ̀dá àwọn àkópọ̀ heterocyclic tuntun pẹ̀lú agbára ìpalára bakitéríà tí a retí, a ṣe ìṣesí acyl chloride 4 pẹ̀lú onírúurú dinucleophiles.
Wọ́n fi hydrazine hydrate tọ́jú acid chloride 4 ní ìwọ̀n 0° fún wákàtí kan. Ó ṣeni láàánú pé wọn kò rí pyrazolone 5 gbà. Ọjà náà jẹ́ acrylamide derivative tí a fi ìrísí rẹ̀ múlẹ̀ nípasẹ̀ data spectral. Ìrísí IR rẹ̀ fi àwọn ìpele absorption ti C=O hàn ní 1720 cm−1, C≡N ní 2228 cm−1 àti NH ní 3424 cm−1. Ìrísí 1H-NMR fi àmì ìyípadà sínglet ti àwọn olefin protons àti NH protons hàn ní 9.3 ppm (wo Apá Ìdánwò).
A fi moolu kan ti phenylhydrazine ṣe atunṣe moolu meji ti acid chloride 4 lati fun N-phenylacryloylhydrazine derivative 7 ni ikore ti o dara (77%) (Àwòrán 5). A fi data infrared spectroscopy jẹrisi eto 7, eyiti o fihan gbigba ti awọn ẹgbẹ C=O meji ni 1691 ati 1671 cm−1, gbigba ti ẹgbẹ CN ni 2222 cm−1 ati gbigba ti ẹgbẹ NH ni 3245 cm−1, ati pe spectrum 1H-NMR rẹ fihan ẹgbẹ CH ni 9.15 ati 8.81 ppm ati proton NH ni 10.88 ppm (wo apakan Idanwo).
Nínú ìwádìí yìí, a ṣe ìwádìí ìhùwàsí acyl chloride 4 pẹ̀lú 1,3-dinucleophiles. Ìtọ́jú acyl chloride 4 pẹ̀lú 2-aminopyridine nínú 1,4-dioxane pẹ̀lú TEA gẹ́gẹ́ bí ìpìlẹ̀ ní iwọ̀n otutu yàrá fún acrylamide derivative 8 (Àwòrán 5), èyí tí a fi dátà spectral dámọ̀. IR spectra fi àwọn ìpele absorption ti cyano stretching ní 2222 cm−1, NH ní 3148 cm−1, àti carbonyl ní 1665 cm−1 hàn; 1H NMR spectra fi hàn pé àwọn olefin protons wà ní 9.14 ppm (wo Apá Ìdánwò).
Àdàpọ̀ 4 ń ṣe àgbékalẹ̀ pẹ̀lú thiourea láti fún pyrimidinethione 9; àdàpọ̀ 4 ń ṣe àgbékalẹ̀ pẹ̀lú thiosemiccarbazide láti fún thiopyrazole tí ó jẹ́ àtúnṣe 10 (Àwòrán 5). A fi ìṣàyẹ̀wò spectral àti elemental jẹ́rìí sí ìṣètò àwọn àdàpọ̀ 9 àti 10 (wo abala Ìdánwò).
A ṣe Tetrazine-3-thiol 11 nípasẹ̀ ìṣesí àdàpọ̀ 4 pẹ̀lú thiocarbazide gẹ́gẹ́ bí 1,4-dinucleophile (Àwòrán 5), a sì fi ìṣètò rẹ̀ múlẹ̀ nípa spectroscopy àti ìwádìí elemental. Nínú ìpele infrared, ìdè C=N farahàn ní 1619 cm−1. Ní àkókò kan náà, ìpele 1H-NMR rẹ̀ pa àwọn àmì multiplate ti àwọn proton aromatic ní 7.78–8.66 ppm àti SH protons ní 3.31 ppm (wo Apá Ìdánwò).
Acryloyl chloride 4 ń ṣe àgbékalẹ̀ pẹ̀lú 1,2-diaminobenzene, 2-aminothiophenol, anthranilic acid, 1,2-diaminoethane, àti ethanolamine gẹ́gẹ́ bí 1,4-dinucleophiles láti ṣẹ̀dá àwọn ètò heterocyclic tuntun (13–16).
A fi ìṣàyẹ̀wò spectral àti elemental hàn pé àwọn ìṣètò àwọn èròjà tuntun wọ̀nyí ni a fi ìṣàyẹ̀wò spectral àti elemental hàn (wo abala Ìṣàyẹ̀wò). A gba 2-Hydroxyphenylacrylamide derivative 17 nípa ṣíṣe àgbékalẹ̀ pẹ̀lú 2-aminophenol gẹ́gẹ́ bí dinucleophile (Àwòrán 6), a sì fi ìṣàyẹ̀wò spectral àti elemental hàn pé ìṣètò rẹ̀. Ìṣàyẹ̀wò infrared ti compound 17 fihàn pé àwọn àmì C=O àti C≡N farahàn ní 1681 àti 2226 cm−1, ní ìtẹ̀léra. Ní àkókò kan náà, spectrum 1H-NMR rẹ̀ pa àmì singlet ti olefin proton ní 9.19 ppm mọ́, proton OH sì farahàn ní 9.82 ppm (wo abala Ìṣàyẹ̀wò).
Ìhùwàsí acid chloride 4 pẹ̀lú nucleophile kan (fún àpẹẹrẹ, ethylamine, 4-toluidine, àti 4-methoxyaniline) nínú dioxane gẹ́gẹ́ bí ohun tí ó ń pò nǹkan àti TEA gẹ́gẹ́ bí ohun tí ń mú kí ó gbóná ní iwọ̀n otútù yàrá fún àwọn ohun tí ó ń pò nǹkan bíi crystalline acrylamide aláwọ̀ ewé 18, 19a, àti 19b. Ìwífún nípa àwọn èròjà àti ìrísí ti àwọn èròjà 18, 19a, àti 19b jẹ́rìí sí ìṣètò àwọn ohun tí ó ń dò nǹkan wọ̀nyí (wo Apá Ìdánwò) (Àwòrán 7).
Lẹ́yìn tí a ti ṣe àyẹ̀wò ìṣiṣẹ́ àwọn kòkòrò àrùn ti onírúurú àdàpọ̀ oníṣẹ́dá, a rí àwọn àbájáde ọ̀tọ̀ọ̀tọ̀ gẹ́gẹ́ bí a ṣe fihàn nínú Táblì 1 àti Àwòrán 8 (wo fáìlì àwòrán). Gbogbo àwọn àdàpọ̀ tí a dán wò fi àwọn ìwọ̀n ìdènà tó yàtọ̀ síra hàn sí bakitéríà Gram-positive MRSA, nígbà tí bakitéríà Gram-negative Escherichia coli fi ìdènà pípé hàn sí gbogbo àwọn àdàpọ̀ náà. A lè pín àwọn àdàpọ̀ tí a dán wò sí ẹ̀ka mẹ́ta ní ìbámu pẹ̀lú ìwọ̀n ìlà tí agbègbè ìdènà náà lòdì sí MRSA. Ẹ̀ka àkọ́kọ́ ló ṣiṣẹ́ jùlọ, ó sì ní àwọn àdàpọ̀ márùn-ún (6, 7, 10, 13b àti 14). Ìwọ̀n ìlà tí agbègbè ìdènà àwọn àdàpọ̀ wọ̀nyí sún mọ́ 4 cm; àwọn àdàpọ̀ tí ó ṣiṣẹ́ jùlọ nínú ẹ̀ka yìí ni àwọn àdàpọ̀ 6 àti 13b. Ẹ̀ka kejì jẹ́ alágbára díẹ̀, ó sì ní àwọn àdàpọ̀ márùn-ún mìíràn (11, 13a, 15, 18 àti 19a). Agbègbè ìdènà àwọn àdàpọ̀ wọ̀nyí wà láti 3.3 sí 3.65 cm, pẹ̀lú àdàpọ̀ 11 tí ó fi agbègbè ìdènà tí ó tóbi jùlọ ti 3.65 ± 0.1 cm hàn. Ní ọwọ́ kejì ẹ̀wẹ̀, ẹgbẹ́ tó kẹ́yìn ní àwọn èròjà mẹ́ta (8, 17 àti 19b) pẹ̀lú agbára ìdènà kòkòrò tó kéré jùlọ (tó kéré sí 3 cm). Àwòrán 9 fi ìpínkiri àwọn agbègbè ìdènà tó yàtọ̀ síra hàn.
Ìwádìí síwájú sí i lórí iṣẹ́ àjẹ́sára àwọn èròjà tí a dán wò jẹ́ mímọ MIC àti MBC fún èròjà kọ̀ọ̀kan. Àwọn àbájáde náà yàtọ̀ díẹ̀ (gẹ́gẹ́ bí a ṣe fihàn ní Táblì 2, 3 àti Àwòrán 10 (wo fáìlì àwòrán)), pẹ̀lú àwọn èròjà 7, 11, 13a àti 15 tí a tún ṣe àtúntò sí gẹ́gẹ́ bí èròjà tó dára jùlọ. Wọ́n ní ìwọ̀n MIC àti MBC tó kéré jùlọ kan náà (39.06 μg/100 μL). Bó tilẹ̀ jẹ́ pé àwọn èròjà 7 àti 8 ní ìwọ̀n MIC tó kéré jùlọ (9.7 μg/100 μL), àwọn ìwọ̀n MBC wọn ga ju (78.125 μg/100 μL). Nítorí náà, a kà wọ́n sí aláìlera ju àwọn èròjà tí a mẹ́nu kàn tẹ́lẹ̀ lọ. Síbẹ̀síbẹ̀, àwọn èròjà mẹ́fà wọ̀nyí ló múná dóko jùlọ nínú àwọn tí a dán wò, nítorí pé àwọn ìwọ̀n MBC wọn wà ní ìsàlẹ̀ 100 μg/100 μL.
Àwọn àdàpọ̀ (10, 14, 18 àti 19b) kò ṣiṣẹ́ dáadáa ju àwọn àdàpọ̀ mìíràn tí a dán wò nítorí pé àwọn iye MBC wọn wà láti 156 sí 312 μg/100 μL. Ní ọwọ́ kejì ẹ̀wẹ̀, àwọn àdàpọ̀ (8, 17 àti 19a) kò ní ìrètí tó pọ̀ jù nítorí wọ́n ní àwọn iye MBC tó ga jùlọ (625, 625 àti 1250 μg/100 μL, lẹ́sẹẹsẹ).
Níkẹyìn, gẹ́gẹ́ bí ìpele ìfaradà tí a fihàn nínú Táblì 3, a lè pín àwọn èròjà tí a dán wò sí ẹ̀ka méjì ní ìbámu pẹ̀lú ọ̀nà ìgbésẹ̀ wọn: àwọn èròjà tí ó ní ipa ìpalára bakitéríà (7, 8, 10, 11, 13a, 15, 18, 19b) àti àwọn èròjà tí ó ní ipa ìpalára bakitéríà (6, 13b, 14, 17, 19a). Láàrín wọn, àwọn èròjà 7, 11, 13a àti 15 ni a fẹ́ràn, èyí tí ó ń fi ìṣiṣẹ́ ìpalára hàn ní ìwọ̀n tí ó kéré gan-an (39.06 μg/100 μL).
Mẹ́wàá lára ​​àwọn èròjà mẹ́tàlá tí a dán wò fi hàn pé ó ṣeé ṣe láti dènà Staphylococcus aureus (MRSA) tí ó lè dènà methicillin tí ó lè dènà aporó hàn. Nítorí náà, a gbani nímọ̀ràn láti ṣe àyẹ̀wò síwájú sí i pẹ̀lú àwọn èròjà tí ó lè dènà aporó (ní pàtàkì àwọn èròjà tí ó bo bakitéríà Gram-positive àti Gram-negative) àti àwọn èròjà tí ó lè dènà àkóràn, àti láti ṣe àyẹ̀wò cytotoxic ti èròjà kọ̀ọ̀kan láti ṣe àyẹ̀wò ààbò rẹ̀.
Àwọn ìwádìí ìdènà mọ́kíríkì ni a ṣe láti ṣe àyẹ̀wò agbára àwọn èròjà tí a ti ṣẹ̀dá gẹ́gẹ́ bí àwọn olùdínà èròjà penicillin-binding protein 2a (PBP2a) nínú Staphylococcus aureus (MRSA) tí ó ní ìdènà methicillin. PBP2a jẹ́ enzyme pàtàkì tí ó ní ipa nínú bíosynthesis ògiri sẹ́ẹ̀lì bakitéríà, ìdíwọ́ enzyme yìí sì ń dí ìṣẹ̀dá ògiri sẹ́ẹ̀lì lọ́wọ́, èyí tí ó yọrí sí ìṣiṣẹ́ bakitéríà àti ikú sẹ́ẹ̀lì1. Àwọn àbájáde ìdènà ni a kọ sí Táblì 4, a sì ṣàlàyé rẹ̀ ní kíkún nínú fáìlì dátà àfikún, àwọn àbájáde náà sì fihàn pé ọ̀pọ̀lọpọ̀ èròjà fi ìdènà tó lágbára hàn fún PBP2a, pàápàá jùlọ àwọn ohun tí ó wà nínú àpò ìṣiṣẹ́ pàtàkì bíi Lys 273, Lys 316, àti Arg 298. Àwọn ìbáṣepọ̀ náà, pẹ̀lú ìdènà hydrogen àti π-stacking, jọra gan-an sí àwọn ti co-crystallized quinazolinone ligand (CCL), èyí tí ó ń fi agbára àwọn èròjà wọ̀nyí hàn gẹ́gẹ́ bí àwọn olùdínà tó lágbára.
Dátà ìdókòwò mọ́líkúùlù, pẹ̀lú àwọn pàrámítà ìṣirò míràn, fi hàn gbangba pé ìdínà PBP2a ni ọ̀nà pàtàkì tí ó fa ìṣiṣẹ́ bakitéríà tí a rí nínú àwọn agbo wọ̀nyí. Àwọn àmì ìdókòwò àti àwọn ìwọ̀n ìpele onígun mẹ́rin (RMSD) tún fi ìbáṣepọ̀ mọ́líkúùlù hàn, èyí tí ó ń ṣètìlẹ́yìn fún àbá yìí. Gẹ́gẹ́ bí a ṣe fihàn nínú Táblì 4, nígbà tí ọ̀pọ̀lọpọ̀ àwọn agbo fihàn ìbáṣepọ̀ mọ́líkúùlù tó dára, àwọn agbo mẹ́ẹ̀kan (fún àpẹẹrẹ, 7, 9, 10, àti 14) ní àwọn àmì ìdókòwò tó ga ju ligand tí a fi kọ síta lọ, èyí tí ó fihàn pé wọ́n lè ní ìbáṣepọ̀ tó lágbára pẹ̀lú àwọn àsìkò ibi tí ó ń ṣiṣẹ́ nínú PBP2a. Síbẹ̀síbẹ̀, àwọn agbo 6 àti 13b tí ó pọ̀ jùlọ fi àwọn àmì ìdókòwò tó kéré díẹ̀ hàn (-5.98 àti -5.63, lẹ́sẹẹsẹ) ní ìfiwéra pẹ̀lú àwọn ligand míràn. Èyí fihàn pé bó tilẹ̀ jẹ́ pé a lè lo àwọn àmì ìdókòwò láti sọ àsọtẹ́lẹ̀ ìbáṣepọ̀ mọ́líkúùlù, àwọn okùnfà míràn (fún àpẹẹrẹ, ìdúróṣinṣin ligand àti ìbáṣepọ̀ mọ́líkúùlù nínú àyíká ẹ̀dá) tún ń kó ipa pàtàkì nínú ṣíṣe ìpinnu ìṣiṣẹ́ bakitéríà. Ní pàtàkì, àwọn ìwọ̀n RMSD ti gbogbo àwọn èròjà tí a ti ṣẹ̀dá wà ní ìsàlẹ̀ 2 Å, èyí tí ó jẹ́rìí sí i pé àwọn ipò ìdè wọn bá ìṣètò ìsopọ̀ ti ligand tí a ti ṣẹ̀dá pọ̀ mu, èyí tí ó tún ń ṣe àtìlẹ́yìn fún agbára wọn gẹ́gẹ́ bí àwọn olùdínà PBP2a tí ó lágbára.
Bó tilẹ̀ jẹ́ pé àwọn àmì ìdènà àti àwọn iye RMS ń fúnni ní àsọtẹ́lẹ̀ tó ṣe pàtàkì, ìbáṣepọ̀ láàrín àwọn àbájáde ìdènà wọ̀nyí àti ìṣiṣẹ́ àwọn kòkòrò àrùn kì í ṣe kedere ní ojú ìwòye àkọ́kọ́. Bó tilẹ̀ jẹ́ pé ìdènà PBP2a ni a fi agbára mú gẹ́gẹ́ bí kókó pàtàkì tó ń nípa lórí ìṣiṣẹ́ àwọn kòkòrò àrùn, ọ̀pọ̀lọpọ̀ ìyàtọ̀ fihàn pé àwọn ohun ìní mìíràn tó wà nínú ẹ̀dá alààyè tún ń kó ipa pàtàkì. Àwọn àkójọpọ̀ 6 àti 13b fi ìṣiṣẹ́ àwọn kòkòrò àrùn tó ga jùlọ hàn, pẹ̀lú ìwọ̀n ìlà opin agbègbè ìdènà ti 4 cm àti iye MIC tó kéré jùlọ (9.7 μg/100 μL) àti MBC (78.125 μg/100 μL), láìka àwọn àmì ìdènà wọn tó kéré sí ní ìfiwéra pẹ̀lú àwọn àkójọpọ̀ 7, 9, 10 àti 14. Èyí fihàn pé bó tilẹ̀ jẹ́ pé ìdènà PBP2a ń ṣe àfikún sí ìṣiṣẹ́ àwọn kòkòrò àrùn, àwọn ohun bíi yíyọ́, wíwà ní àyíká àti ìṣiṣẹ́ ìbáṣepọ̀ nínú àyíká bakitéríà tún ń nípa lórí ìṣiṣẹ́ gbogbogbòò. Àwòrán 11 fi àwọn ipò ìdènà wọn hàn, èyí tó fihàn pé àwọn àkójọpọ̀ méjèèjì, kódà pẹ̀lú àwọn àmì ìdènà tó kéré, ṣì lè bá àwọn àkójọpọ̀ pàtàkì ti PBP2a lò, èyí tó lè mú kí ìdènà náà dúró ṣinṣin. Èyí fi hàn gbangba pé bó tilẹ̀ jẹ́ pé ìdènà molecule ń fúnni ní òye pàtàkì nípa ìdíwọ́ PBP2a, a gbọ́dọ̀ gbé àwọn ohun mìíràn tí ó ní í ṣe pẹ̀lú ẹ̀dá alààyè yẹ̀ wò láti lóye ipa gidi ti àwọn èròjà wọ̀nyí.
Nípa lílo ìṣètò kírísítà ti PBP2a (PDB ID: 4CJN), a ṣe àwọn máàpù ìbáṣepọ̀ 2D àti 3D ti àwọn èròjà tí ó ń ṣiṣẹ́ jùlọ 6 àti 13b tí a fi prótínì-binding protein 2a (PBP2a) ti methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) dì mọ́ra. Àwọn máàpù wọ̀nyí fi àwọn ìlànà ìbáṣepọ̀ ti àwọn èròjà wọ̀nyí wéra pẹ̀lú ligand quinazolinone co-crystallized co-crystallized (CCL), tí ó ń ṣàfihàn àwọn ìbáṣepọ̀ pàtàkì bíi ìsopọ̀ hydrogen, π-stacking, àti àwọn ìbáṣepọ̀ ionic.
A ṣe akiyesi iru ilana kanna fun compound 7, eyiti o fihan ami docking giga (-6.32) ati iwọn ila opin agbegbe idena kanna (3.9 cm) si compound 10. Sibẹsibẹ, MIC rẹ (39.08 μg/100 μL) ati MBC (39.06 μg/100 μL) ga pupọ, ti o fihan pe o nilo awọn ifọkansi giga lati fi ipa antibacterial han. Eyi daba pe botilẹjẹpe compound 7 fihan ifẹmọmọ ti o lagbara ninu awọn ikẹkọ docking, awọn okunfa bii bioavailability, gbigba sẹẹli, tabi awọn ohun-ini physicochemical miiran le dinku ipa ti o ni ninu isedale. Biotilẹjẹpe compound 7 fihan awọn ohun-ini ipakokoro, o kere si ni idilọwọ idagbasoke kokoro arun ni akawe pẹlu compound 6 ati 13b.
Àdàpọ̀ 10 fi ìyàtọ̀ tó lágbára hàn pẹ̀lú àmì ìdè tó ga jùlọ (-6.40), èyí tó fi hàn pé ó ní ìsopọ̀ tó lágbára pẹ̀lú PBP2a. Síbẹ̀síbẹ̀, agbègbè ìdènà rẹ̀ (3.9 cm) jọ àdàpọ̀ 7, àti MBC rẹ̀ (312 μg/100 μL) ga ju àdàpọ̀ 6, 7, àti 13b lọ, èyí tó fi hàn pé kò lágbára láti pa bakitéríà. Èyí fi hàn pé láìka àwọn àsọtẹ́lẹ̀ tó dára sí, àdàpọ̀ 10 kò ṣiṣẹ́ dáadáa rárá nínú pípa MRSA nítorí àwọn nǹkan míì bíi yíyọ́, ìdúróṣinṣin, tàbí àìní agbára nínú awọ ara bakitéríà. Àwọn àbájáde wọ̀nyí ṣe àtìlẹ́yìn fún òye pé bó tilẹ̀ jẹ́ pé ìdènà PBP2a kó ipa pàtàkì nínú ìṣiṣẹ́ bakitéríà, kò ṣàlàyé ìyàtọ̀ nínú ìṣiṣẹ́ baèríà tí a rí láàárín àwọn àdàpọ̀ tí a dán wò. Àwọn ìyàtọ̀ wọ̀nyí fi hàn pé a nílò àwọn àyẹ̀wò ìwádìí síwájú sí i àti àwọn àyẹ̀wò baèríà tó jinlẹ̀ láti ṣàlàyé àwọn ọ̀nà ìdènà bakitéríà tó ní í ṣe pẹ̀lú rẹ̀ ní kíkún.
Àbájáde ìdókòwò molecule ní Táblì 4 àti Fáìlì Dáta Àfikún fi ìbáṣepọ̀ tó díjú hàn láàrín àwọn àmì docking àti iṣẹ́ antimicrobial. Bó tilẹ̀ jẹ́ pé àwọn èròjà 6 àti 13b ní àmì docking tó kéré ju àwọn èròjà 7, 9, 10, àti 14 lọ, wọ́n fi agbára antimicrobial tó ga jùlọ hàn. Àwọn àwòrán ìbáṣepọ̀ wọn (tí a fi hàn ní Àwòrán 11) fihàn pé láìka àwọn àmì didè wọn tó kéré síi sí, wọ́n ṣì ń ṣe àwọn ìdè hydrogen pàtàkì àti àwọn ìbáṣepọ̀ π-stacking pẹ̀lú àwọn ohun pàtàkì PBP2a tí ó lè mú kí enzyme-inhibitor complex dúró ṣinṣin ní ọ̀nà tó ṣe àǹfààní fún ìṣẹ̀dá. Láìka àwọn àmì docking tó kéré síi ti 6 àti 13b sí, ìṣiṣẹ́ antimicrobial wọn tó pọ̀ síi fihàn pé ó yẹ kí a gbé àwọn ohun ìní mìíràn bí ìyọ́kúrò, ìdúróṣinṣin, àti ìgbamu sẹ́ẹ̀lì yẹ̀ wò ní ìbámu pẹ̀lú dátà docking nígbà tí a bá ń ṣe àyẹ̀wò agbára inhibitor. Èyí fi hàn pé ó ṣe pàtàkì láti so àwọn ìkẹ́kọ̀ọ́ docking pọ̀ mọ́ ìwádìí antimicrobial láti ṣe àyẹ̀wò agbára ìtọ́jú àwọn èròjà tuntun dáadáa.
Àwọn àbájáde wọ̀nyí fi hàn pé bó tilẹ̀ jẹ́ pé molecular docking jẹ́ ohun èlò tó lágbára fún sísọ àsọtẹ́lẹ̀ ìsopọ̀mọ́ra àti dídá àwọn ọ̀nà tó ṣeé ṣe láti dènà, kò yẹ kí a gbẹ́kẹ̀lé e nìkan láti pinnu ipa antimicrobial. Àwọn ìwádìí molecule fihàn pé ìdènà PBP2a jẹ́ kókó pàtàkì tó ń nípa lórí iṣẹ́ antimicrobial, ṣùgbọ́n àwọn ìyípadà nínú iṣẹ́ abẹ̀mí fihàn pé àwọn ohun ìní physicochemical àti pharmacokinetic mìíràn gbọ́dọ̀ jẹ́ èyí tó dára jùlọ láti mú kí ìlera sunwọ̀n síi. Àwọn ìkẹ́kọ̀ọ́ ọjọ́ iwájú yẹ kí ó dojúkọ ṣíṣe àtúnṣe ìṣètò kẹ́míkà ti compounds 7 àti 10 láti mú bioavailability àti cellular uptake dara síi, kí ó rí i dájú pé àwọn ìfarakanra docking tó lágbára ni a túmọ̀ sí iṣẹ́ antimicrobial gidi. Àwọn ìwádìí síwájú síi, pẹ̀lú àwọn bioassays àfikún àti ìṣàyẹ̀wò ìṣètò-àgbékalẹ̀ (SAR), yóò ṣe pàtàkì láti mú òye wa pọ̀ sí i nípa bí àwọn compounds wọ̀nyí ṣe ń ṣiṣẹ́ gẹ́gẹ́ bí àwọn inhibitors PBP2a àti láti ṣe àgbékalẹ̀ àwọn antimicrobial tó munadoko jù.
Àwọn èròjà tí a ṣe láti inú 3-(anthracen-9-yl)-2-cyanoacryloyl chloride 4 fi onírúurú ìwọ̀n ìṣiṣẹ́ aporó hàn, pẹ̀lú ọ̀pọ̀lọpọ̀ èròjà tí ó fi ìdíwọ́ pàtàkì fún Staphylococcus aureus (MRSA) tí ó ní ìdènà methicillin hàn. Ìwádìí ìbáṣepọ̀ ìṣiṣẹ́-ẹ̀rọ (SAR) fi àwọn ànímọ́ ìṣètò pàtàkì tí ó wà lábẹ́ agbára aporó aporó àwọn èròjà wọ̀nyí hàn.
Wíwà àwọn ẹgbẹ́ acrylonitrile àti anthracene jẹ́ pàtàkì fún mímú kí iṣẹ́ antimicrobial pọ̀ sí i. Ẹgbẹ́ nitrile tí ó ní agbára púpọ̀ nínú acrylonitrile ṣe pàtàkì láti mú kí ìbáṣepọ̀ pẹ̀lú àwọn protein bakiteria rọrùn, nípa bẹ́ẹ̀ ó ń ṣe àfikún sí àwọn agbára antimicrobial ti èròjà náà. Àwọn èròjà tí ó ní acrylonitrile àti anthracene fi agbára antimicrobial tí ó lágbára hàn nígbà gbogbo. Adùn ẹgbẹ́ anthracene tún mú kí àwọn èròjà wọ̀nyí dúró ṣinṣin, èyí tí ó lè mú kí iṣẹ́ wọn nínú ẹ̀dá alààyè sunwọ̀n sí i.
Ìmújáde àwọn òrùka heterocyclic mú kí agbára antibacterial ti ọ̀pọ̀lọpọ̀ àwọn ohun èlò ìtọ́jú ara sunwọ̀n síi. Ní pàtàkì, àwọn ohun èlò ìtọ́jú antibacterial benzothiazole 13b àti acrylhydrazide 6 fi agbára antibacterial tó ga jùlọ hàn pẹ̀lú agbègbè ìdènà tó tó nǹkan bí 4 cm. Àwọn ohun èlò ìtọ́jú heterocyclic wọ̀nyí fi àwọn ipa ìtọ́jú ara tó ṣe pàtàkì hàn, èyí tó fihàn pé ìṣètò heterocyclic kó ipa pàtàkì nínú àwọn ipa antibacterial. Bákan náà, pyrimidinethione nínú compound 9, thiopyrazole nínú compound 10, àti tetrazine ring nínú compound 11 ṣe alabapin sí àwọn ohun èlò ìtọ́jú antibacterial ti àwọn compounds, èyí tó tún fi hàn pé ìyípadà heterocyclic ṣe pàtàkì.
Láàrín àwọn èròjà tí a ti ṣẹ̀dá, 6 àti 13b yọrí sí àwọn iṣẹ́ antibacterial tó dára jùlọ. Ìwọ̀n ìdènà tó kéré jùlọ (MIC) ti compound 6 jẹ́ 9.7 μg/100 μL, àti ìwọ̀n ìdènà bakiteria tó kéré jùlọ (MBC) jẹ́ 78.125 μg/100 μL, èyí tó fi hàn pé ó ní agbára tó dára láti mú Staphylococcus aureus (MRSA) tó ní methicillin kúrò. Bákan náà, compound 13b ní agbègbè ìdènà tó tó 4 cm àti ìwọ̀n MIC àti MBC tó kéré, èyí tó fi hàn pé ó ní agbára antibacterial. Àwọn àbájáde wọ̀nyí fi àwọn ipa pàtàkì tí àwọn ẹgbẹ́ acrylohydrazide àti benzothiazole ń kó hàn nínú ṣíṣe ìpinnu bí àwọn compound wọ̀nyí ṣe ń ṣiṣẹ́ dáadáa.
Ní ìyàtọ̀ sí èyí, àwọn èròjà 7, 10, àti 14 fi agbára ìdènà àrùn díẹ̀ hàn pẹ̀lú àwọn agbègbè ìdènà tí ó wà láti 3.65 sí 3.9 cm. Àwọn èròjà wọ̀nyí nílò ìfọ́pọ̀ gíga láti pa àwọn èròjà bakitéríà náà pátápátá, gẹ́gẹ́ bí a ṣe rí i nínú àwọn ìwọ̀n MIC àti MBC wọn tí ó ga. Bó tilẹ̀ jẹ́ pé àwọn èròjà wọ̀nyí kò ṣiṣẹ́ tó àwọn èròjà 6 àti 13b, wọ́n ṣì fi agbára ìdènà àrùn hàn, èyí tí ó fihàn pé fífi àwọn èròjà acrylonitrile àti anthracene sínú òrùka heterocyclic ń ṣe àfikún sí ipa ìdènà àrùn wọn.
Àwọn àdàpọ̀ náà ní onírúurú ọ̀nà ìgbésẹ̀, àwọn kan ń fi agbára ìpalára bakteria hàn àti àwọn mìíràn ń fi ipa bacteriostatic hàn. Àwọn àdàpọ̀ 7, 11, 13a, àti 15 jẹ́ apakokoro bakteria wọ́n sì nílò ìwọ̀n díẹ̀ láti pa bakiteria pátápátá. Ní ìyàtọ̀ sí èyí, àwọn àdàpọ̀ 6, 13b, àti 14 jẹ́ apakokoroaati ...
Ni gbogbogbo, itupalẹ ibatan eto-iṣẹ ṣe afihan pataki ti fifi awọn nkan acrylonitrile ati anthracene ati awọn ẹya heterocyclic sinu lati ṣaṣeyọri iṣẹ-ṣiṣe antibacterial pataki. Awọn abajade wọnyi daba pe iṣapeye awọn eroja eto wọnyi ati wiwa awọn iyipada siwaju sii lati mu idinku ati agbara awọ ara dara si le ja si idagbasoke awọn oogun egboogi-MRSA ti o munadoko diẹ sii.
A ti wẹ gbogbo awọn reagents ati awọn solvents mọ́ ati gbẹ nipa lilo awọn ilana boṣewa (El Gomhouria, Egypt). A pinnu awọn aaye yo nipa lilo ohun elo GallenKamp elekitironiki melting point ati pe a royin laisi atunṣe. A gbasilẹ awọn spectra infrared (IR) (cm⁻1) ni Ẹka Kemistri, Faculty of Science, Ain Shams University nipa lilo awọn pellets potassium bromide (KBr) lori Thermo Electron Nicolet iS10 FTIR spectrometer (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA).
A gba awọn ifihan agbara 1H NMR ni 300 MHz nipa lilo ẹrọ iwoye GEMINI NMR (GEMINI Manufacturing & Engineering, Anaheim, CA, USA) ati ẹrọ iwoye BRUKER 300 MHz NMR (BRUKER Manufacturing & Engineering, Inc.). A lo Tetramethylsilane (TMS) gẹgẹbi boṣewa inu pẹlu deuterated dimethyl sulfoxide (DMSO-d₆). A ṣe awọn wiwọn NMR ni Oluko ti Imọ-jinlẹ, Ile-ẹkọ giga Cairo, Giza, Egypt. A ṣe itupalẹ elemental (CHN) nipa lilo ẹrọ itupalẹ elemental Perkin-Elmer 2400 ati awọn abajade ti a gba wa ni ibamu daradara pẹlu awọn iye iṣiro.
A fi omi wẹ̀ àdàpọ̀ ásídì 3 (5 mmol) àti thionyl chloride (5 ml) fún wákàtí mẹ́rin. A yọ thionyl chloride tí ó pọ̀ jù kúrò nípa ṣíṣe àtúnṣe lábẹ́ ìfúnpá tí ó dínkù. A kó lílo pupa tí ó yọrí sí i, a sì lò ó láìsí ìwẹ̀nùmọ́ mọ́. Ààyè yíyọ́: 200-202 °C, èso: 88.5%. IR (KBr, ν, cm−1): 2224 (C≡N), 1737 (C=O). 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 9.26 (s, 1H, CH=), 7.27-8.57 (m, 9H, heteroaromatization). 13C NMR (75 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 115.11 (C≡N), 124.82–130.53 (CH anthracene), 155.34, 114.93 (CH=C–C=O), 162.22 (C=O); HRMS (ESI) m/z [M + H]+: 291.73111. Onímọ̀ nípa ìwádìí. A ṣírò rẹ̀ fún C18H10ClNO (291.73): C, 74.11; H, 3.46; N, 4.80. A rí i: C, 74.41; H, 3.34; N, 4.66%.
Ní 0°C, a tú 4 (2 mmol, 0.7 g) sínú dioxane anhydrous (20 ml) àti hydrazine hydrate (2 mmol, 0.16 ml, 80%) ni a fi kún un ní ìsàlẹ̀, a sì rú u fún wákàtí kan. A kó ohun tí ó rọ̀ sílẹ̀ náà jọ nípa ṣíṣe àtúnṣe, a sì tún un ṣe láti inú ethanol láti fún un ní èròjà 6.
Àwọn kirisita aláwọ̀ ewé, ojú ìyọ́ 190-192℃, èso 69.36%; IR (KBr) ν=3424 (NH), 2228 (C≡N), 1720 (C=O), 1621 (C=N) cm−1. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 9.3 (br s, H, NH, tí a lè yípadà), 7.69-8.51 (m, 18H, heteroaromatic), 9.16 (s, 1H, CH=), 8.54 (s, 1H, CH=); Iye tí a ṣírò fún C33H21N3O (475.53): C, 83.35; H, 4.45; N, 8.84. A rí i: C, 84.01; H, 4.38; N, 8.05%.
Tú 4 (2 mmol, 0.7 g) sínú 20 milimita omi dioxane anhydrous (tí ó ní ìṣàn díẹ̀ ti triethylamine), fi phenylhydrazine/2-aminopyridine (2 mmol) kún un kí o sì pò ó ní iwọ̀n otutu yàrá fún wákàtí kan àti méjì, lẹ́sẹẹsẹ. Tú adalu ìṣe náà sínú yìnyín tàbí omi kí o sì fi acid hydrochloric acid tí a ti pò sílẹ̀. Tọ́ omi líle tí a yà sọ́tọ̀ kúrò kí o sì tún uncrystallize kúrò nínú ethanol láti gba 7 kí o sì tún uncrystallize kúrò nínú benzene láti gba 8.
Àwọn kirisita aláwọ̀ ewé, ojú ìyọ́ 160-162℃, èso 77%; IR (KBr, ν, cm−1): 3245 (NH), 2222 (C≡N), 1691 (C=O), 1671 (C=O) cm−1. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 10.88 (s, 1H, NH, tí a lè yípadà), 9.15 (s, 1H, CH=), 8.81 (s, 1H, CH=), 6.78-8.58 (m, 23H, heteroaromatic); Iye tí a ṣírò fún C42H26N4O2 (618.68): C, 81.54; H, 4.24; N, 9.06. A rí i: C, 81.96; H, 3.91; N, 8.91%.
A tú 4 (2 mmol, 0.7 g) sínú 20 milimita omi dioxane anhydrous (tí ó ní ìṣàn díẹ̀ ti triethylamine), a fi 2-aminopyridine (2 mmol, 0.25 g) kún un, a sì rú adalu náà ní iwọ̀n otutu yàrá fún wákàtí méjì. A da adalu ìṣe náà sínú omi yìnyín, a sì fi acid hydrochloric tí a ti pò kún un. A yọ ìṣàn omi tí ó ṣẹ̀dá kúrò, a sì tún un ṣe láti inú benzene, èyí tí ó fúnni ní àwọn kirisita aláwọ̀ ewé ti 8 pẹ̀lú ojú ìyókù 146-148 °C àti ìyọrísí 82.5%; infrared spectrum (KBr) ν: 3148 (NH), 2222 (C≡N), 1665 (C=O) cm−1. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ (ppm): 8.78 (s, H, NH, tí a lè yípadà), 9.14 (s, 1H, CH=), 7.36-8.55 (m, 13H, heteroaromatization); A ṣírò rẹ̀ fún C23H15N3O (348.38): C, 79.07; H, 4.33; N, 12.03. A rí i: C, 78.93; H, 3.97; N, 12.36%.
A tú àdàpọ̀ 4 (2 mmol, 0.7 g) sínú 20 milimita ti dioxane gbígbẹ (tí ó ní ìṣàn díẹ̀ ti triethylamine àti 2 mmol ti thiourea/semicarbazide) a sì gbóná rẹ̀ lábẹ́ reflux fún wákàtí méjì. A tú àdàpọ̀ náà jáde nínú vacuo. A tún yọ àdàpọ̀ náà kúrò nínú dioxane láti fún ni àdàpọ̀ náà.